|
Диски с антибиотиками предназначены
для определения чувствительности к антибиотикам возбудителей
заболевании, выделенных из патологического материала
больных.
На основании данных о чувствительности выделенного
микроорганизма к различным антибиотикам осуществляется
выбор оптимального препарата для лечения больного,
а также подбор
эффективной схемы антибиотикотерпии.
Диски изготовлены из картона, обладающего специальными
свойствами, и пропитаны стандартными растворами антибиотиков
определенной концентрации.
Содержание антибиотика в диске, указанное на этикетке, соответствует
рекомендациям ВОЗ.
Для предотвращения намокания дисков во флаконах находится
силикагель. Цвет силикагеля не имеет диагностического
значения. Обычно поставка комплектуется бесцветным
силикагелем, но по усмотрению производителя может быть
голубым или светло красным.
Методика определения чувствительности
Питательные среды
Для определения чувствительности рекомендуется использовать
питательный агар для определения чувствительности микроорганизмов
к антибиотикам - АГВ, с содержанием триптического гидролизата
кильки 25,0 г/л, крахмала растворимого 0,5 г/л, натрия
хлористого 5,0 г/л, натрия фосфорнокислого двузамещенного
1,0 г/л, агара 13,5
г/л, рН -7.4+0,2.
Для гемофильных микроорганизмов, не растущих на обычных
питательных средах, в указанную выше питательную среду
добавляют 5% дефибринированной или гемолизированной
крови. Подготовка чашек Петри
Расплавленную среду разливают по 15 мл в стерильные
чашки Петри диаметром 100 мм, расположенные на горизонтальной
поверхности.
Перед заражением поверхность застывшей
среды подсушивают в течение 30-40 мин. Приготовление
инокулята и нанесение его на поверхность агаровой
среды
Инокулят готовят из чистой 18-20-часовой культуры
бактерий, выросшей на поверхности плотной питательной
среды. Для этого 5-1% изолированных колоний суспедируют
в жидкой питательной среде или в изотоническом растворе
хлорида натрия.
В качестве инокулята можно использовать
также чистую 18-20 часовую бульонную культуру. Суспензию
или бульонную культуру разводят изотоническим раствором
хлорида натрия до мутности оптического стандарта
на 10 ЕД, затем полученную взвесь разводят повторно
еще
в 20 раз.
Инокулят в объеме 1 мл наносят на поверхность агаровой среды и равномерно распределяют
путем покачивания чашки.
Избыток жидкости удаляют пипеткой. Приоткрытые чашки
подсушивают при комнатной температуре в течение 10-15 минут. Наложение
дисков с антибиотиком
Диски с антибиотиками с помощью пинцета накладывают
на поверхность зараженной питательной среды на одинаковом
расстоянии
один от другого и примерно на расстоянии 2 см от края
чашки. На одну чашку следует помещать не более 6 дисков
с антибиотиками.
Инкубация чашек Петри
Чашки инкубируют в термостате в течение 18-20 часов
при t=35-37°С перевернутым кверху дном.
Учет результатов
С помощью линейки или измерителя /кронциркуль, штангенциркуль/
измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков
с антибиотиками, включая диаметр самих дисков с точностью
до 1 мм.
При
не резко очерченных краях зон или зонах с двойными
контурами следует измерить диаметр зоны по наиболее
четкому контуру.
Интерпретация полученных результатов
Оценку результатов проводят по таблице
1, которая содержит пограничные значения диаметров
зон задержки роста для устойчивых, умеренно чувствительных
и чувствительных
штаммов.
Полученные значения диаметров зон задержки роста
сравнивают с пограничными значениями в таблице 1 и
относят изучаемые штаммы к одной из трех категорий
чувствительности.
Контроль воспроизводимости и точности полученных результатов
Для контроля воспроизводимости и точности процедуры
определения чувствительности необходимо при каждой
постановке теста параллельно испытуемыми штаммами использовать
эталонные штаммы Escherichia coli /АТСС 25922/, Staphylococcus
aureus /АТСС 25923/ и Pseudomonas aeruginosa /АТСС
27853/.
Диаметры зон задержки роста эталонных штаммов
должны соответствовать указанным в таблице
2.
Эталонные штаммы используют для проверки качества
дисков, среды и правильности методики постановки теста. |
